層析實(shí)驗(yàn)冷柜主要用在生命科學(xué)研究的高校學(xué)科和科研院所,主要用來進(jìn)行各種酶類,肽類,大分子,核酸等物質(zhì)的生化層析分析試驗(yàn)。也可用于其他需要低溫環(huán)境的實(shí)驗(yàn),或用于物品冷藏。上知信儀器專門為對溫度要求很高的各種應(yīng)用設(shè)計(jì),可以在箱內(nèi)操作層析設(shè)備和其它簡易安裝的儀器和設(shè)備。
薄層層析可以對物質(zhì)成分進(jìn)行定性和定量測定。
定性分析——根據(jù)日光或紫外光,不同成分的不同顯色,判定物質(zhì)的組成成分。
定量分析——洗脫法測定成分含量或薄層掃描法測定含量。
一、薄層層析定性檢測
1)物理方法:主要紫外燈下檢測,利用物質(zhì)在254、365nm這兩個單色光下產(chǎn)生不同顏色不同強(qiáng)度熒光來檢測或利用在該光下不產(chǎn)生熒光而在熒光板上成為暗斑的方式檢測。
2)化學(xué)方法:主要指顯色劑顯色法:顯色劑分通用型和專屬型。通用型能廣泛的與不同類型化合物反應(yīng)。專屬型對某類化合物,共有某種功能基化合物起反應(yīng)。常見通用型顯色劑有碳化試劑(含不同濃度的酸)、磷鉬酸、三氯化銻、還有水。專屬型顯色劑,較多、復(fù)雜、具體物質(zhì)可照藥典操作及查閱有關(guān)文獻(xiàn)資料。
3)生物方式:將某些特定細(xì)菌的凝膠混懸液倒在展開后的薄層板上,用適當(dāng)溫度培養(yǎng)一段時(shí)間,以此檢測某些具有抑菌或殺菌的活性物質(zhì)。
二、薄層層析定量測定
1)斑點(diǎn)刮取定量:
刮取隨行對照品同位置供試品的斑點(diǎn),用適當(dāng)溶媒提取后,用紫外分光法、氣相法、原子吸收分光光度等色譜手段測定。
2)直接定量:
a比斑點(diǎn)面積:用每格1mm2透明格紙蓋在薄層板上測量斑點(diǎn)所占面積mm2與對照品相互比較,定量誤差在10-20之間。
b薄層掃描法:實(shí)際工作原則是:用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長一定強(qiáng)度的光,照射在薄層板斑點(diǎn)上,進(jìn)行掃描,用儀器測量通過斑點(diǎn)的光束強(qiáng)度的變化,從而達(dá)到定量的目的。
測定方式分類:反射法:測量反射光的強(qiáng)度。
透射法:測量透射光的強(qiáng)度。
掃描方式分類:單波長法、單光束法;單波長、雙光束法;雙波長法。
薄層掃描儀的組成:光源、單色器、薄層板臺架及驅(qū)動裝置、檢測器、數(shù)據(jù)處理儀。操作方法步驟有供試品前處理、點(diǎn)樣、展開、上機(jī)掃描、數(shù)據(jù)處理。